微生物的生長,除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營養物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類不同,培養的方式和條件也不盡相同,其貯存方法也是很有講究的。
細菌和其它生物一樣,大多數屬異養菌,必須從周圍環境中攝取營養,進行新陳代謝及生長繁殖等生命活動。人為的提供細菌生長繁殖所需的營養物質(適宜的培養基)和創造適合細菌生長繁殖的有利條件如溫度、濕度、氣體等,能使細菌在體外迅速生長繁殖。
正確配制培養基是微生物培養的基礎步驟之一,實驗室使用各種基礎成分制備培養基時,應按照配方準確配制,并記錄相關信息,如:培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便溯源。
培養基滅菌常見的滅菌方法有:
1.化學物質滅菌:藥物與微生物細胞中的成分反應,使蛋白質變性、酶失活;使用范圍:器皿、雙手和實驗室、無菌室的環境滅菌,不能用于培養基滅菌;常用的有酒精、來蘇爾等。
2.輻射滅菌:原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學反應造成菌體死亡;常用的有紫外線、X射線和γ射線,用于室內空氣及器皿表面滅菌。
3.干熱滅菌:原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質變性和電解質濃縮作用而殺滅微生物;常用灼燒和電熱箱加熱,140-180℃ 1-2小時,適于對玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。
4.濕熱滅菌:原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽在冷凝時能釋放出大量潛熱,蒸汽具有強大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡,水煮常壓滅菌:100℃,或飽和蒸汽滅菌:一般121℃,30分鐘,適合培養基和發酵設備滅菌。
5.過濾除菌:除菌原理是利用微生物不能透過濾膜除菌,方法是使用0.01~0.45 μm孔徑濾膜,用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。