農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 克隆與表達
簡要描述：
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 克隆與表達EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，染色體背景為C58，核基因含篩選標簽—利fu平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件 質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DN
產(chǎn)品時間：2024-06-25
打印當前頁EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
EHA105菌株；農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA101；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉(zhuǎn)基因研究；
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2473-1000UL | EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 288 |
MF2473-5000UL | EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1228 |
產(chǎn)品描述：
EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，染色體背景為C58，核基因含篩選標簽—利fu平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105（pTiBo542DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105（pTiBo542DT-DNA）質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。在EHA105菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup，即得到：EHA105 (pSoup)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復制，同時賦予該菌株四環(huán)素（tetR）抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。
我司（懋康生物）提供的EHA105 (pSoup)化學轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，基因型為C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine (pSoup-tetR)，經(jīng)pGs2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2473-1000UL | MF2473-5000UL | ||
MF2473-A | EHA105(pSoup)Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2473-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，1年有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） 整個轉(zhuǎn)化操作，嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。
3） 加入質(zhì)粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
4） 為確保轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應減少最終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質(zhì)粒用量。
7） 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈mei素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素，因Ti質(zhì)粒丟失的概率極低（基本可以忽略）
8） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于10μl）質(zhì)粒DNA，用手撥da管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
【注意】：次使用，建議做預實驗確定所加質(zhì)粒的用量。
3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2-3h。
4) 6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意】：當平板只含50μg/ml卡那mei素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和10μg/ml利fu平時，需28℃培養(yǎng)48-60h；當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時，需28℃培養(yǎng)60-72h；不建議使用超過20μg/ml的利fu平用于平板或液體培養(yǎng)。
5）目的克隆的液體培養(yǎng)：
j小量搖菌：往15ml的圓底透氣試管中加入1ml含對應抗生素的LB液體培養(yǎng)基，從新鮮培養(yǎng)的平板上挑1-2個單菌落接種，30℃，200rpm搖菌24-48h。
k大量搖菌：100ml透氣三角瓶內(nèi)加入少于20ml含對應抗生素的LB液體培養(yǎng)基，取小搖菌液按2%比例接菌，30℃，200rpm搖菌24-48h。
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MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
MS0014-5G | Rifampicin, USP Grade 利fu平 | 5g |
MS0016-5G | Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate壯觀mei素二鹽suan鹽五水合物 | 5g |
MS0016-25G | Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate壯觀mei素二鹽suan鹽五水合物 | 25g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0017-25G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 25g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0019-25G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 25g |
MS0025-1G | Gentamycin Sulfate Salt硫酸慶大mei素 | 1g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素 | 25g |
附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan鎂MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表3常見農(nóng)桿菌對抗生素敏感性總表
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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